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影響細(xì)胞生長最常見的五類因素

發(fā)布時間:2023-07-21    瀏覽次數(shù):1799

細(xì)胞生長狀態(tài)受多種因素影響,在培養(yǎng)細(xì)胞時,我們知道溫度不能過高也不能過低,有些細(xì)胞培養(yǎng)前還需要包被培養(yǎng)瓶,但實驗過程中我們很容易忽略這些小因素,導(dǎo)致細(xì)胞負(fù)傷慘重。

這些小細(xì)節(jié)究竟如何影響的細(xì)胞狀態(tài)?在培養(yǎng)時我們又該如何避免?本期整理了影響細(xì)胞生長最常見的五類因素,助您完美避坑!

01 細(xì)胞生長附著物

貼壁細(xì)胞在正常情況下都會貼壁,但某些細(xì)胞本身貼壁不牢或貼壁性差,而包被附著物能夠促進(jìn)細(xì)胞的黏附,所以在培養(yǎng)一些特殊細(xì)胞時,需要對培養(yǎng)瓶/皿進(jìn)行包被后使用。常用的基質(zhì)有多聚賴氨酸(D型、L型)、明膠、膠原蛋白、細(xì)胞外基質(zhì)混合物,培養(yǎng)時可根據(jù)需要自行選擇。

小貼士:細(xì)胞貼壁差時可使用基質(zhì)包被培養(yǎng)瓶/皿。

02 細(xì)胞之間的接觸程度

正常細(xì)胞(二倍體)存在貼壁接觸抑制,長滿后細(xì)胞生長停止,而腫瘤細(xì)胞等非正常細(xì)胞,接觸抑制作用較弱,可生長至較高的細(xì)胞密度,但某些細(xì)胞一旦長過,其損傷難以逆轉(zhuǎn),所以培養(yǎng)細(xì)胞時不建議細(xì)胞密度太高。

小貼士:無論什么細(xì)胞,都不能長滿再傳代,一般細(xì)胞匯合度達(dá)到70-80%即可傳代。

03 培養(yǎng)基PH值

大多數(shù)細(xì)胞系在PH7.4左右時生長最好,而常規(guī)培養(yǎng)基的指示劑為酚紅,所以多數(shù)情況下,我們所見的培養(yǎng)基都呈紅色,但不同培養(yǎng)基的顏色會有差異,例如DMEM比1640顏色深一點。在培養(yǎng)細(xì)胞時,也可以根據(jù)培養(yǎng)基的顏色判斷細(xì)胞狀態(tài),如隨著細(xì)胞生長,pH值會變成黃色。

小貼士:培養(yǎng)時時刻關(guān)注培養(yǎng)基顏色變化,發(fā)現(xiàn)異常及時處理。

04 氣相成分

大部分培養(yǎng)基適合于95%空氣 5%CO2,但有部分培養(yǎng)基例外,如L15培養(yǎng)基適合于100%空氣,CO2會導(dǎo)致培養(yǎng)液PH降低(培養(yǎng)液變黃),嚴(yán)重影響細(xì)胞生長;若需要用L15培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,但沒有100%空氣培養(yǎng)箱時,可以擰緊瓶蓋或換培養(yǎng)基(效果可能更好)培養(yǎng)。適用于CO2環(huán)境的培養(yǎng)基需保持培養(yǎng)瓶透氣。

小貼士:培養(yǎng)細(xì)胞時注意參照說明書選擇培養(yǎng)基,并注意培養(yǎng)壞境。

05 培養(yǎng)溫度

對于大部分人源細(xì)胞和溫血動物細(xì)胞系來講,比較適宜的培養(yǎng)溫度是37℃,因為這個溫度接近體溫,但為了安全可以再稍低一些,高于體溫的溫度要比低于體溫的溫度更易產(chǎn)生問題。對于鳥類細(xì)胞,由于其體溫較高,所以培養(yǎng)溫度可以設(shè)置為38.5℃左右。

小貼士:培養(yǎng)細(xì)胞時保持溫度穩(wěn)定,不要長時間敞開培養(yǎng)箱的門,并且不要將培養(yǎng)器皿大量重疊堆放在培養(yǎng)箱中,避免空氣不循環(huán)。

細(xì)胞培養(yǎng)基