金葡標準檢驗方法常見的難點
發(fā)布時間：2024-11-20 瀏覽次數(shù)：321
來源：環(huán)凱轉(zhuǎn)載于“ 六扇門Study”公眾號，作者~SIXDoors
前段時刻，某專業(yè)群有老師發(fā)了一張BP平板圖
“哇，好漂亮的涂布板”
（圖片來自網(wǎng)友分享）
由此引發(fā)了大家對金葡標準檢驗方法的討論
1、怎么操作才能涂布出這么漂亮的板？
2、GB4789.10-2016版標準對金葡典型和可疑菌落的表述不清晰，新標準會如何修改？
BP板涂布操作技巧寶典
選擇合適的稀釋梯度，這個很關(guān)鍵，如果稀釋梯度不夠，菌落密集疊加，很難分開，上圖如果菌落再少一半，就更完美了。
平板里傾注的BP培養(yǎng)基不能太薄，4mm較好。
使用微量移液槍將樣品轉(zhuǎn)移到平板上，控制樣品的流量，使其不會濺出平板。
涂布時最好使用翹起頂端L棒，涂布更均勻。標準中要求涂布0.3，0.3，0.4，盡量不要涂0.4，平均成0.3，0.35，0.35，分布相對更平均一點，也更容易吸收。
涂布時盡量涂干，如果涂布后，液體吸收不好，可以放在潔凈工作臺上，繼續(xù)吹五分鐘就可以了。
冷藏過的平板需要恢復(fù)到室溫后再使用，同時注意平板表面不能有冷凝水，免得影響涂布效果。最好一個一個培養(yǎng)皿攤開，恢復(fù)室溫會比較快，否則疊放在一起，中間的平板可能會沒有恢復(fù)到室溫。
典型和可疑菌落的表述很重要
上圖是2016版標準對BP平板上金黃色葡萄球菌典型菌落的描述，大家看看懵圈不？
首先，8.4.1對菌落的描述，這是典型菌落？還是可疑菌落？
描述的有“不透明沉淀環(huán)和清晰帶”的算，沒有的也算，到底啥樣的算？
還是前半部分描述的是典型菌落，后半部分是可疑菌落？
其次，8.4.2先選擇了典型菌落，然后8.4.3再從典型菌落里選擇可疑菌落，誰告訴小六，到底怎么選？
結(jié)果計算的要求又是計算典型菌落，“可疑菌落”選出來是干啥用的？
8.4.2還說3個平板所有菌落數(shù)合計在20CFU~200CFU 之間的平板,計數(shù)典型菌落數(shù)；
第九章又說“典型菌落數(shù)在20CFU~200CFU 之間”，這前后表達也不一致??！
典型和可疑菌落的表述很重要，與后面計數(shù)和確認時挑取菌落的選擇原則有密切關(guān)系。
坊間傳聞，GB4789.10啟動修訂
標準會修改Baird-Parker 平板菌落形態(tài)描述，提高標準適用性。建議增加一些典型圖例，方便大家理解。
此外，新標準還計劃修改以下內(nèi)容：
（1）第一法定性檢測，增加金黃色葡萄球菌顯色平板法；
（2）第二法定量檢測，增加“金黃色葡萄球菌測試片”初篩方法，提高檢測效率，據(jù)說已經(jīng)完成實驗室內(nèi)驗證；
（3） 附錄 B 增加金葡總腸毒素檢測，優(yōu)化腸毒素提取流程，據(jù)說是酶聯(lián)免疫方法，可采用試劑盒或全自動酶聯(lián)免疫設(shè)備進行檢測，現(xiàn)在還在驗證階段；
（4）標準中增加“質(zhì)控菌株”。
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