金黃色葡萄球菌在自然界中無(wú)處不在,空氣、水、灰塵及人和動(dòng)物的排泄物中都可找到。因此,食品受到污染的機(jī)會(huì)很多。美國(guó)疾病控制中心報(bào)告,由金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位,僅次于大腸桿菌。金黃色葡萄球菌腸毒素是個(gè)世界性衛(wèi)生難題,在美國(guó)由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒,占整個(gè)細(xì)菌性食物中毒的33%,加拿大則更多,占到45%,中國(guó)金黃色葡萄球菌引起的食物中毒事件也時(shí)有發(fā)生。
一、生物學(xué)特性
典型的金黃色葡萄球菌為球型,直徑0.5-1μm左右,顯微鏡下排列成葡萄串狀見(jiàn)圖1,圖2。
大多數(shù)菌株產(chǎn)生類胡蘿卜素,使細(xì)胞團(tuán)呈現(xiàn)出深橙色到淺黃色,色素的產(chǎn)生取決于生長(zhǎng)條件,故稱為金黃色葡萄球菌。金黃色葡萄球菌無(wú)芽胞、鞭毛,大多數(shù)無(wú)莢膜,革蘭氏染色陽(yáng)性。金黃色葡萄球菌營(yíng)養(yǎng)要求不高,在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好,需氧或兼性厭氧,最適生長(zhǎng)溫度37℃,最適生長(zhǎng)pH 7.4,干燥環(huán)境下可存活數(shù)周。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起,直徑1-2mm。血平板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性,可在10-15%NaCl肉湯中生長(zhǎng)??煞纸馄咸烟恰Ⅺ溠刻?、乳糖、蔗糖,產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽(yáng)性,VP反應(yīng)弱陽(yáng)性。
二、流行病學(xué)
(1)季節(jié)分布,多見(jiàn)于春夏季;中毒食品種類多,如奶、肉、蛋、魚(yú)及其制品。此外,剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報(bào)道。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%,所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。一般說(shuō),金黃色葡萄球菌可通過(guò)以下途徑污染食品。
(2)食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌,造成食品污染;食品在加工前本身帶菌,或在加工過(guò)程中受到了污染,產(chǎn)生了腸毒素,引起食物中毒;熟食制品包裝不嚴(yán),運(yùn)輸過(guò)程受到污染;奶?;蓟撔匀橄傺谆蚯菪缶植炕摃r(shí),對(duì)肉體其他部位的污染。
三、檢測(cè)方法
1、樣品制備: 稱取25g樣品至盛有225mL 7.5%氯化鈉肉湯中,固體樣品研磨或置均質(zhì)器中做成1:10的樣品混懸液。若供計(jì)數(shù)檢驗(yàn),可按十進(jìn)制遞增稀釋法將樣品勻液再進(jìn)行適當(dāng)稀釋。
2、 增菌與分離培養(yǎng): 將上述樣品勻液于36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長(zhǎng)。將上述培養(yǎng)物,分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板,血平板 36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培養(yǎng)24h~48h。 金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上,菌落直徑為2mm~3mm,顏色呈灰色到黑色,邊緣為淡色,周圍為一混濁帶,在其外層有一透明圈見(jiàn)圖[4]。用接種針接觸菌落有似奶油至樹(shù)膠樣的硬度,偶然會(huì)遇到非脂肪溶解的類似菌落;但無(wú)混濁帶及透明圈。長(zhǎng)期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產(chǎn)生的黑色較淡些,外觀可能粗糙并干燥。在血平板上,形成菌落較大,圓形、光滑凸起、濕潤(rùn)、金黃色(有時(shí)為白色),菌落周圍可見(jiàn)完全透明溶血圈見(jiàn)圖[5]。挑取上述菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗(yàn)。
3、 鑒定: (1) 染色鏡檢: 金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽(yáng)性球菌,排列呈葡萄球狀,無(wú)芽孢,無(wú)莢膜,直徑約為0.5μm~1μm。見(jiàn)圖6
(2) 血漿凝固酶試驗(yàn): 取0.5ml兔血漿,放入小試管,再加入BHI培養(yǎng)物0.2mL~0.3mL,振蕩搖勻,置36℃±1℃培養(yǎng),每隔半小時(shí)觀察一次,連續(xù)觀察6小時(shí),出現(xiàn)凝固即將小管傾斜或倒置,內(nèi)容物不流動(dòng),判為陽(yáng)性,同時(shí)做陰陽(yáng)對(duì)照見(jiàn)圖7。
環(huán)凱提供金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)系列產(chǎn)品,為微生物監(jiān)控保駕護(hù)航:
金黃色葡萄球菌檢驗(yàn) | ||||
用途 | 產(chǎn)品類型 | 貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
增菌 | 干粉 | 024010 | 7.5%氯化鈉肉湯 | 250g/瓶 |
顆粒 | 024010P1 | 7.5%氯化鈉肉湯(顆粒型) | 250g/瓶 | |
即用型 | 24010G1 | 7.5%氯化鈉肉湯(管裝成品) | 10mL×10支 | |
即用型 | CP0700 | 7.5%氯化鈉肉湯(袋裝成品) | 225mL×10袋 | |
樣品 處理 | 干粉 | 022117 | 磷酸鹽緩沖液(PBS) | 250g/瓶 |
即用型 | CP0640 | 磷酸鹽緩沖液(袋裝成品) | 225mL×10袋 | |
CP0511A | 磷酸鹽緩沖液(瓶裝成品) | 225mL×6瓶 | ||
CP0630 | 生理鹽水(袋裝成品) | 225ml/袋×10 | ||
樣品稀釋 | 即用型 | CP0310 | 生理鹽水(管裝成品) | 9mL×20支 |
分離 | 干粉基礎(chǔ) | 024040 | Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ) | 250g/瓶 |
添加劑 | 029195 | 卵黃亞碲酸鉀增菌液(Baird-Parker瓊脂配套試劑)(小包裝) | 5mL×5支(小包裝) | |
029192 | 卵黃亞碲酸鉀增菌液(Baird-Parker瓊脂配套試劑)(大包裝) | 25mL×6支(大包裝) | ||
即用型 | 024040A | Baird-Parker瓊脂平板 | 90mm×20個(gè)/盒 | |
干粉基礎(chǔ) | 024060 | 血瓊脂基礎(chǔ) | 250g/瓶 | |
即用型 | 024070 | 血平板 | 90mm×20個(gè)/盒 | |
干粉 | CRM012 | 金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基 | 1000mL/瓶 | |
即用型 | CRM012A | 金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基平板 | 90mm×20個(gè)/盒 | |
純 培 養(yǎng) | 干粉 | 024053 | 腦心浸出液肉湯(BHI) | 250g/瓶 |
即用型 | 024053A | 腦心浸出液肉湯(BHI)(管裝成品) | 90mm×20個(gè)/盒 | |
干粉 | 022020 | 營(yíng)養(yǎng)瓊脂(NA) | 250g/瓶 | |
顆粒 | 022020P1 | 營(yíng)養(yǎng)瓊脂(NA)顆粒培養(yǎng)基 | 250g/瓶 | |
即用型 | 024089 | 營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板 | 90mm×20個(gè)/盒 | |
鑒定 | 生化管 | 029180 | 凍干血漿 | 10支/盒 |
產(chǎn)毒實(shí)驗(yàn) | 試劑盒 | 354SET01-96 | 葡萄球菌腸毒素檢測(cè)試劑盒 | 12條,8孔/條 |
核酸快速檢測(cè)/鑒定 | FZ004BF2 | 金黃色葡萄球菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? | 48test | |
質(zhì)控菌種 | 陽(yáng)性對(duì)照 | FSCC223005 | 金黃色葡萄球菌 | |
陰性對(duì)照 | FSCC223011 | 表皮葡萄球菌 |